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恒遠生物|配制培養(yǎng)基的4大原則

  • 發(fā)布日期:2023-11-21      瀏覽次數(shù):1210
    • 一、目的明確


      培養(yǎng)不同的微生物必須采用不同的培養(yǎng)條件,培養(yǎng)目的不同,原料的選擇和配比不同,例如:枯草芽孢桿菌,一般培養(yǎng),肉湯培養(yǎng)基或LB培養(yǎng)基;自然轉化,基礎培養(yǎng)基,觀察芽孢,生孢子培養(yǎng)基,產蛋白酶以玉米粉、黃豆餅粉為主的產酶培養(yǎng)基;根據(jù)不同的工作目的,微生物不同的營養(yǎng)需要,運用自己豐富的生物化學和微生物學知識來配制最-佳的培養(yǎng)基。


      二、營養(yǎng)協(xié)調


      微生物細胞組成元素的調查或分析,是設計培養(yǎng)基時的重要參考依據(jù)。微生物細胞內各種成分間有一較穩(wěn)定的比例。在大多數(shù)化能異養(yǎng)菌的培養(yǎng)基中,各營養(yǎng)要素間在量上的比例大體符合以下十倍序列的遞減規(guī)律:

      要素:H2O>C源+能源 >N 源 >P、S>K、Mg>生長因子

      含量:(~10-1) (~10-2) (~10-3) (~10-4) (~10-5)  (~10-6)


      A. 選擇適宜的營養(yǎng)物質,實驗室的常用培養(yǎng)基:


      細菌:牛肉-膏蛋白胨培養(yǎng)基(或簡稱普通肉湯培養(yǎng)基);

      放線菌:高氏1號合成培養(yǎng)基培養(yǎng);

      酵母菌:麥芽汁培養(yǎng)基;

      霉菌:查氏合成培養(yǎng)基;

      實驗室一般培養(yǎng):普通常用培養(yǎng)基;

      遺傳研究:成分清楚的合成培養(yǎng)基;

      生理、代謝研究:選用相應的培養(yǎng)基配方;


      B. 營養(yǎng)物質濃度及配比合適


      營養(yǎng)物質的濃度適宜, 營養(yǎng)物質之間的配比適宜;高濃度糖類物質、無機鹽、重金屬離子等不僅不能維持和促進微生物的生長,反而起到抑制或殺菌作用。培養(yǎng)基中各營養(yǎng)物質之間的濃度配比也直接影響微生物的生長繁殖和(或)代謝產物的形成和積累,其中碳氮比(C/N)的影響較大。真菌需C/N比較高的培養(yǎng)基;(素食)細菌(動物病原菌)需C/N比較低的培養(yǎng)基;(葷食)


      發(fā)酵生產谷氨酸時:

      碳氮比為4/1時,菌體大量繁殖,谷氨酸積累少;

      碳氮比為3/1時,菌體繁殖受到抑制,谷氨酸產量則大量增加。

      NH3 > CO(NH2)2 > NH4NO3 > (NH4)2CO3 > (NH4)2SO4

      含氮量(82%)(46%)  (35%)  (29.2%)  (21%)

      這說明在同樣重量時,在以上各氮源中含氮量以氨為zui-高,尿素次之,硝-酸銨和碳酸銨geng次之,而硫酸銨則最-低。


      三、理化適宜


      指培養(yǎng)基的pH值、滲透壓、水活度和氧化還原電勢等物理化學條件較為適宜。包括:pH、滲透壓和水活度、氧化還原電位


      (1) pH


      各大類微生物都有其生長適宜的pH范圍,培養(yǎng)基的pH必須控制在一定的范圍內,以滿足不同類型微生物的生長繁殖或產生代謝產物。

      通常培養(yǎng)條件:(初始pH )

      細菌: pH 7.0~8.0

      放線菌:pH 7.5~8.5

      酵母菌: pH 3.8~6.0

      霉菌:pH 4.0~5.8

      藻類: pH 6.0~7.0

      原生動物: pH 6.0~8.0

      嗜極菌(extremophiles)

      在微生物的生長、代謝過程中會產生引起培養(yǎng)基pH改變的代謝產物,為了維持培養(yǎng)基pH的相對恒定,通常要進行pH的調節(jié)。

      pH的調節(jié)包括pH的內源調節(jié)和pH的外源調節(jié)。

      a.pH的內源調節(jié):通過培養(yǎng)基內在成分所起的調節(jié)作用,就是pH的內源調節(jié)。

      第1種是采用磷酸緩沖液進行調節(jié)。

      [K2HPO4]/[KH2PO4]=1時,溶液的pH穩(wěn)定在6.8。

      調節(jié)K2HPO4和KH2PO4兩者濃度比可獲得pH 6.0~7.6間的一系列穩(wěn)定的pH。

      反應原理:K2HPO4+HCl→KH2PO4+KCl KH2PO4+KOH→K2HPO4+H2O

      第二種以CaCO3作“備用堿"進行調節(jié)。CaCO3(不溶于水又是沉淀性的,在培養(yǎng)基中分布不均勻)、NaHCO3均可用來調節(jié)培養(yǎng)基的pH。

      b.pH的外源調節(jié)這是一類按實際需要不斷從外界流加酸或堿液,以調整培養(yǎng)液的方法。


      (2) 滲透壓和水活度


      滲透壓是某水溶液中一個可用壓力來量度的一個物化指標。它表示兩種濃度不同的溶液間被一個半透性薄膜隔開時,稀溶液中的水分子會因水勢的推動而透過隔膜流向濃溶液,直到濃溶液產生的機械壓力足以使兩邊水分子的進出達到平衡為止,這時由濃溶液中的溶質所產生的機械壓力,即為它的滲透壓值。與微生物細胞滲透壓相等的等滲溶液最-適宜微生物的生長;高滲溶液會使細胞發(fā)生質壁分離;低滲溶液則會使細胞吸水膨脹,形成很高的膨壓,這對細胞壁脆弱或喪失的各種缺壁細胞,例如原生質體、球狀體或支原體來說,則是致命的。水活度即aw(wateractivity)是一個比滲透壓更-有生-理意義的一個物化指標。它表示在天然或人為環(huán)境中,微生物可實際利用的自由水或游離水的含量。各種微生物生長繁殖范圍的aw值在0.998~0.6之間。


      (3)氧化還原電勢


      又稱氧化還原電位,是度量某氧化還原系統(tǒng)中還原劑釋放電子或氧化劑接受電子趨勢的一種指標。一般以Eh表示,它是指以氫電極為標準時某氧化還原系統(tǒng)的電極電位值,單位是V(伏)或mV(毫伏)。

      不同類型微生物生長對氧化還原電位的要求不同:

      好氧性微生物:+0.1伏以上時可正常生長,以+0.3~+0.4伏為宜;

      厭氧性微生物:低于+0.1伏條件下生長;

      兼性厭氧微生物:+0.1伏以上時進行好氧呼吸,+0.1伏以下時進行發(fā)酵。

      氧化還原電位與氧分壓和pH有關,也受某些微生物代謝產物的影響,增加通氣量(如振蕩培養(yǎng)、攪拌)提高培養(yǎng)基的氧分壓,或加入氧化劑,從而增加Eh值在培養(yǎng)基中加入巰基乙醇、抗壞血酸(Vc,0.1%)、硫化氫(0.025%)、半胱氨酸(<0.05%)、谷胱甘肽、鐵屑、二硫蘇糖醇、庖肉(瘦牛肉粒)等還原性物質可降低Eh值。測定氧化還原電勢除用電位計外,還可在培養(yǎng)基中加入化學指示劑刃天青(resazurin)進行間接測定。刃天青在無氧條件下呈無色(Eh=-40 mV);在有氧條件下,其顏色與溶液的pH相關;(中性—紫色;堿性—藍色;酸性—紅色);在微量氧時,它呈粉紅色。


      四、經(jīng)濟節(jié)約


      配制培養(yǎng)基時應盡量利用廉價且易于獲得的原料作為培養(yǎng)基成份,特別是在發(fā)酵工業(yè)中,以降低  生產成本。


      (1)以粗代精:對微生物來說,各種粗原料營養(yǎng)更-加完-全,效果更-好。而且在經(jīng)濟上也節(jié)約。大量的農副產品或制品,如麩皮、米糠、玉米漿、酵母浸膏、酒糟、豆餅、花生餅、蛋白胨等都是常用的發(fā)酵工業(yè)原料。


      (2)以“野"代“家": 以野生植物原料代替栽培植物原料,如木薯、橡子、薯芋等都是富含淀粉質的野生植物,可以部分取代糧食用于工業(yè)發(fā)酵的碳源。


      (3)以廢代好:以工農業(yè)生產中易污染環(huán)境的廢棄物作為培養(yǎng)微生物的原料。例如,糖蜜(制糖工業(yè)中含有蔗糖的廢液)、乳清(乳制品工業(yè)中含有乳糖的廢液)、 豆制品工業(yè)廢液、黑廢液(造紙工業(yè)中含有戊糖和己糖的亞硫酸紙漿)等。工業(yè)上的甲烷發(fā)酵主要利用廢水、廢渣作原料,在我國農村,已推廣利用糞便及禾草為原料發(fā)酵生產甲烷作為燃料。


      (4)以簡代繁:某制藥廠改進鏈霉素發(fā)酵液中的原有配方,設法減去30-50%的黃豆餅粉、25%的葡萄糖和20%硫酸銨,結果反而提高了產量。


      (5)以氮代朊:以大氣氮、銨鹽、硝酸鹽或尿素等一類非蛋白質或非氨基酸廉價原料用作發(fā)酵培養(yǎng)基的原料,讓微生物轉化成菌體蛋白質或含氮的發(fā)酵產物供人們利用。


      (6)以纖代糖:開發(fā)利用纖維素這種世界上含量最-豐富的可再生資源。將大量的纖維素農副產品轉變?yōu)閮?yōu)質飼料、工業(yè)發(fā)酵原料、燃料及人類的食品及飲料。


      (7)以“國"代“進": 以國產原料代替進口原料,盡量減少工業(yè)成本。國內青霉素發(fā)酵工業(yè)的迅速發(fā)展,依賴于找到了富有中國特色的培養(yǎng)基配方,即用廉價的棉子餅(或花生餅)和白玉米粉代替玉米漿和乳糖。

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